A Novel Aptamer-Based Assay For Capturing Total Erythropoietin (Epo)

• Main Author: Toh , Saw Yi
• Format: Thesis
• Published: 2015
• Subjects: RK1-715 Dentistry
• Online Access: http://eprints.usm.my/32385/

Penyalahgunaan rekombinan erythropoietin (EPO) manusia semakin berleluasa dalam kalangan atlet dan ini menimbulkan keperluan untuk memantau penggunaannya demi memastikan keadilan dalam sukan dan agar dapat melindungi kesihatan para atlet. Kaedah semasa yang diluluskan oleh WADA untuk mengesan penyalahgunaan EPO dalam kalangan atlet ialah 'isoelectric-focusing (IEF) double-immunoblotting'. Sebelum proses IEF double-immunoblotting, had kepekatan EPO yang lebih tinggi diperlukan untuk mendapatkan hasil yang jelas. Kaedah semasa untuk menumpukan EPO seperti ultraturasan adalah mahal dan tidak spesifik manakala strategi yang lebih khusus seperti penulenan berasaskan lektin membawa kepada penulenan glycoprotin lain juga. Di samping itu, penulenan berasaskan antibodi mahal dan ini mungkin akan menyebabkan penyahaslian protein sasaran yang tidak dapat dikembalikan. Perkara ini menekankan keperluan untuk menggunakan unsur pengiktirafan molekul yang lebih sesuai. Oleh sebab aptamer mempunyai pelbagai kelebihan berbanding dengan antibodi, ia boleh menjadi ejen yang berpotensi tinggi untuk memerangkap dan memekatkan EPO sebelum proses IEF double-immunoblotting. Recombinant human erythropoietin (EPO) abuse is rampant among athletes, which raises the need to monitor its usage to ensure „fair play‟ in sports and for the sake of the athlete‟s health. The current method approved by WADA for the detection of EPO abuse among athletes is the isoelectric focusing (IEF) double-immunoblotting, which requires concentrated form of EPO for a clear-cut result. Current method of concentrating EPO such as ultrafiltration is expensive and non-specific while a more specific strategy such as lectin-based purification leads to the purification of other glycoproteins. In addition, antibody-based purification is also expensive and possibly imparts irreversible denaturation of the target protein, suggesting the „adoption‟ of a more amenable molecular recognition element. Aptamer, owing to its vast array of advantages over the antibodies, can be a potential agent for capturing and concentrating EPO prior to IEF-double immunoblotting.